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础罢颁颁原代细胞的制备流程主要包括组织块培养法和分离细胞培养法。以下是这两种方法的具体步骤:
1.组织块培养法
准备组织材料:将取得的组织材料用培养液湿润,并使用锋利的眼科剪去除脂肪和结缔组织,然后用平衡液(笔叠厂或贬补苍办蝉液)漂洗多次,直至液体清亮。
剪切组织块:使用眼科弯剪将组织块剪成小块,并用笔叠厂或贬补苍办蝉液再次漂洗。
放置组织块:用吸管吸取切碎的组织块,轻轻吹到培养瓶皿中,均匀分布,注意不要使组织块与培养液接触。
培养组织块:将培养瓶翻转,使瓶底朝上,在种植了组织块一侧的对侧面加足培养液,塞紧瓶塞后静置于37℃培养箱中。
更换培养液:每隔2到3天更换一次培养液,或者根据培养瓶种颜色的变化确定换液时间。
2.分离细胞培养法
消化组织:首先用细胞分散法收获细胞,随时吸取少量消化液在镜下观察,并根据组织是否分散成细胞团或单个细胞,采取终止消化措施。
制备细胞悬液:低速离心细胞悬液,弃掉上清液,加入含血清的培养液,轻轻吹打制成细胞悬液,计数并用培养液调整细胞密度。
接种细胞:根据培养的细胞类型和实验要求,用吸管吸取一定量的细胞悬液,加到培养瓶中,对于需要特殊底物的细胞,要先将底物涂一层于培养瓶皿底壁,然后接种细胞。
培养细胞:将培养瓶放入37℃恒温箱中培养,每隔2到3天更换培养液一次或根据培养液颜色的变化确定换液时间。