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内参蛋白抗体

更新时间:2017-04-20 点击量:1501

内参蛋白抗体

内参(Internal Control)是指试验系统的内部参照,一般对于哺乳动物细胞表达系统来说是指由看家基因(house keeping gene)编码表达的蛋白,他们在各种不同组织和细胞中的表达都相对恒定,在实验中检测蛋白表达水平时,常常选来作为参照物。上节我们介绍了三种常用胞浆的内参蛋白(肌动蛋白,β-Actin;β-球管蛋白,β-Tubulin;甘油醛-3-磷酸脱氢酶,GAPDH),这一节我们将会介绍其他几种内参蛋白。

Na/k泵通道蛋白(Na+/K+-ATPase),即Na+/K+-ATP酶,是一种整合膜蛋白。其由1023个氨基酸组成,分子量为113KD。用WB方法检测一种膜蛋白的表达时,多选用Na+/K+-ATPase作为内参。如果还在为WB实验中膜蛋白检测的内参选择烦恼,推荐可以试试Cloud-Clone Corp. 制备的Na+/K+-ATPase内参抗体。

*氧化酶 IV(COX IV)是一种异源寡聚酶,通常含有13个亚基,定位于线粒体内膜,是线粒体呼吸链的酶复合物。由于在线粒体外膜和质膜上都有COX IV,COX IV抗体常用作检测线粒体蛋白的内参抗体,其分子量为16kD左右。

笔颁狈础即增殖细胞核抗原,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名,以后的研究发现笔颁狈础与细胞顿狈础合成关系密切,在细胞增殖的启动上起重要作用,是反映细胞增殖状态的良好指标。在细胞核内合成,并存在于细胞核内,其由261个氨基酸组成,分子量为36碍顿。&苍产蝉辫;制备的笔颁狈础抗体可以作为研究增殖细胞及肿瘤细胞的内参抗体。奥叠检测多种细胞,笔颁狈础均有表达,见图1。但是笔颁狈础对于非增殖细胞或经过抗增殖处理的细胞并不是一个好的内参。

Lamin B即核纤层蛋白B, 是凋亡关键因素Caspase家族的作用靶子,受Caspase 的剪切而活化,位于核膜。其由586个氨基酸组成,分子量为66KD。由于核纤层蛋白B在物种间的高度保守性,常常被选用做内参。当WB的目的蛋白为核蛋白时,可选用 制备的Lamin B内参抗体。但是对于没有核被膜的样品核纤层蛋白B是不适合的。在凋亡实验时,Lamin B也不适合作为内参。

组蛋白Histone H3.1由于是染色体的组成型表达组分,表达比较稳定,经常被作为zui广泛的核内参使用。组蛋白是和DNA等核酸组合在一起形成核蛋白,换句话,核蛋白组成成分是组蛋白,也非常保守,不会因为受到处理而改变,所以用于作为内参。 组蛋白Histone H3.1由136个氨基酸组成,分子量为15KD。 已成功制备的组蛋白Histone H3.1抗体,可作为研究核蛋白的内参抗体。

在选用内参时,需综合考虑样本种属来源,目的蛋白分子量和目的蛋白表达部位以及实验环境,选择合适的内参,保证实验结果的准确性。