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重组柔嫩艾美耳球虫SO7 蛋白的的原核表达及其对同源性感染的免疫保护性研究

实验原理

通过原核表达系统大肠杆菌来表达柔嫩艾美耳球虫的一个抗原基因厂翱7，把纯化出来的蛋白进行免疫，首免和二免后感染，观察免疫效果。

实验试剂

罢4顿狈础连接酶；限制性内切酶；质粒小提试剂盒；顿狈础胶回收试剂盒

实验设备

笔颁搁仪；伯乐电泳仪；台式高速冷冻离心机

实验材料

鸡：一日龄的SPF 鸡。

球虫：北京艾美耳球虫强毒株。

细菌：胸苷酸酶基因突变以后形成的&肠丑颈;13型的大肠杆菌。

质粒：辫惭骋36别重组质粒是由中国科学院微生物研究所提供的。

实验步骤

1. 构建没有抗药基因的重组表达载体：pMG36t-SO7；
2. 阳性重组大肠杆菌的鉴定和构建的pMG36t-SO7的稳定性鉴定；
3. 用氯化钙处理E. coli χ13 使pMG36t-SO7进入到E. coli χ13体内thyA突变位置处；

4. 用LB培养基培养E. coli χ13，筛选阳性的E. coli χ13，即：E. coli χ2；

5. SO7 蛋白在E.coli χ2里表达的鉴定：用SDS-PAGE和蛋白质印迹法来进行；
6. 用艾美尔球虫卵囊对鸡进行免疫和攻毒。免疫和感染程序见下图：

                     

7. 用E.coli χ2介导的免疫反应；

8. E.coli χ2对同源感染的免疫效果的评估；
9. 数据分析。

注意事项

近年来活的弱毒苗已经开始使用了。然而，在使用这种疫苗时安全问题不容忽视，另外，大规模生产活的弱毒苗价格很昂贵，新一代的疫苗，像使用基因重组技术来表达寄生虫抗原，将会产生更好的预防效果。

对于一个成功的重组疫苗来说，一种有效的抗原呈递系统是至关重要的，抗原的入侵途径和抗原的选择也是影响成功的决定性因素。

在感染过程中，针对球虫会产生特异性的抗体，而且这些抗体对处在细胞外阶段的球虫也能发生中和反应。